Исследование по оптимизации последующего процесса очистки жидкости урожая куриных эмбрионов от вируса гриппа типа IV (Часть 1)

Грипп (также известный как грипп) — это очень заразное респираторное инфекционное заболевание, которое может вызывать различные респираторные заболевания. По авторитетным данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), вирусы гриппа ежегодно угрожают примерно одному миллиарду человек. Вирусы гриппа (IV) относятся к семейству Orthomyxoviridae и представляют собой одноцепочечные вирусы с отрицательной-РНК. Частицы вируса гриппа имеют сферическую форму, диаметром 80-120 нм, а их структуру можно разделить снаружи на три слоя: оболочку, матриксные белки и ядро.

 

Структура вирусов гриппа А и В

Противовирусные препараты и прямая вакцинация против гриппа являются решающими шагами в современном лечении и профилактике гриппа. В настоящее время матрица куриных эмбрионов и клеточная матрица являются широко используемыми методами в исследованиях вакцин против гриппа, при этом куриные эмбрионы являются наиболее часто выбираемым выбором для приготовления жидкости вируса гриппа исследователями как внутри страны, так и за рубежом. Аллантоисная вирусная жидкость куриного эмбриона содержит многочисленные примеси, такие как овальбумин и структурные белки вируса. Овальбумин является важным компонентом, который может вызывать аллергические реакции у людей, иммунизированных вакциной. Таким образом, осветление, концентрирование и очистка аллантоисной вирусной жидкости куриных эмбрионов являются важными шагами в разработке вакцин против вируса гриппа.

В настоящее время широко используемой технологией очистки жидкости для сбора вирусов является центрифугирование + глубокая фильтрация. К основным методам очистки вируса гриппа относятся ультрафильтрация, ультрацентрифугирование, гель-фильтрационная хроматография и комбинированная хроматография.

Целью данного исследования является изучение инфекционных характеристик четырех вирусов гриппа -H1N1, H3N2, BV и BY- у куриных эмбрионов в возрасте 9–11 дней. Моновалентную вирусную аллантоисную жидкость получали посредством культуры куриных эмбрионов, чтобы обеспечить основной материал для последующей вирусной обработки. В ходе исследования сравнивались различные методы осветления, концентрирования и очистки для оптимизации отделения целевого белка от других компонентов (таких как разные белки и овальбумин).

Дорожная карта экспериментальных технологий

Куриные эмбрионы культивировали при 37 градусах в течение 9-11 дней. Затем им были привиты вирус гриппа А (A1 для H1N1, A3 для H3N2) с MOI 1:10000 и вирус гриппа B (B1 для BV, B2 для BY) с MOI 1:10000. Вирусы H1N1 и H3N2 культивировали при 33-34 градусах в течение 48 часов, а вирусы BV и BY культивировали при 33 градусах в течение 7,2 часов. Затем эмбрионы охлаждали и собирали аллантоисную жидкость. Аллантоисная жидкость имела высокое содержание общего белка, высокую вязкость и выглядела мутной, что затрудняло осветление.

Влияние различных процессов осветления на качество жидкости сбора вируса гриппа типа IV

Осветление является важным этапом процесса очистки, служащим предварительной очисткой от большого количества нерастворимых примесей. На этом этапе в качестве сырья используется аллантоисная жидкость. После непрерывного высокоскоростного-центрифугирования жидкость осветляется и фильтруется через фильтрующие картриджи с размерами пор 3 мкм, 0.8+0.45мкм и 3 мкм и 0.8+0.65мкм. Исследуется влияние двух размеров фильтрующих картриджей на процесс и результаты осветления, а также выбирается подходящая схема осветления для определения оптимального процесса осветления.

Результаты четырех типов испытаний осветляющей жидкости для вируса гриппа показаны на рисунках. 1-3 . CA1-1 представляет результаты испытаний осветляющей жидкости с использованием фильтрующих картриджей 3 мкм и 0.8+0.65 мкм, CA1-2 представляет результаты испытаний осветляющей жидкости с использованием фильтрующих картриджей 3 мкм и 0.8+0.45 мкм, а остальные аналогичны.

Рисунок 1. Результаты определения содержания общего белка в осветленном растворе вируса гриппа -

Рисунок 2. Результаты выявления вируса гриппа в осветленном растворе - титр гемагглютинации

Рисунок 3. Результаты обнаружения осветленного раствора вируса гриппа -, скорость удаления общего белка

Результаты показали, что, хотя между группами были количественные различия в общем содержании белка и скорости удаления общего белка, существенных различий не было. Это может быть связано с тем, что размеры пор фильтрующих картриджей были слишком малы, и все они могли соответствовать требованиям по очистке. Что касается титра свертывания крови, фильтрующие картриджи 3 мкм и 0.8+0.45 мкм показали более высокие титры свертывания крови. Поэтому для оптимального очищения были выбраны меньшие размеры пор фильтрующих картриджей 3 мкм и 0.8+0.45 мкм.

Ссылки: Хуан, Жентянь. Оптимизация последующего процесса производства четырехвалентной сплит-вакцины против вируса гриппа [D]. Шэньянский сельскохозяйственный университет, 2024 г. DOI: 10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595.